La disponibilité des médicaments modernes anti-hépatite B (VHB) avec des indications claires pour leur administration nécessite une vérification précise et rapide du diagnostic. Cependant, en raison de la rareté des données cliniques dans les premières semaines de la maladie et du nombre limité de méthodes d'analyse par immunoanalyse, le taux de diagnostic diminue.
La présence de marqueurs anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe permet de confirmer le VHB ou d'établir le fait d'une maladie antérieure. Mais il est possible de déterminer la présence de particules virales actives dans le sang et de compter leur nombre au moment de l’étude par PCR - un test quantitatif en temps réel pour la détection de l’hépatite B. La méthode, en comparaison avec les méthodes de diagnostic ELISA, résout les problèmes de diagnostic et permet de prédire l’évolution de la maladie médicaments antiviraux.
Bases du diagnostic de maladie
Le diagnostic de l'hépatite B repose sur l'évaluation des manifestations cliniques, le dosage immunoenzymatique et les méthodes de recherche instrumentales. La maladie survient dans la phase aiguë qui suit la période d'incubation et, en fonction de la dose d'infection et de l'efficacité du traitement, entre dans une phase chronique. L'objectif principal du traitement est d'empêcher la chronisation, c'est-à-dire l'élimination de toutes les particules virales du sang. L'évolution clinique de la maladie est une guérison sans virémie ultérieure.
Le fait d'éliminer l'infection doit être prouvé par une méthode de recherche quantitative.
Comme tout dosage immunoenzymatique qualitatif permet de diagnostiquer le VHB indirectement, il ne montre pas la présence de l'agent pathogène dans l'environnement interne du corps, mais caractérise la réponse immunitaire à l'infection, il est difficile de prouver l'efficacité du traitement et le traitement curatif. Par conséquent, le patient atteint d'hépatite B ou présentant des critères de diagnostic favorables doit subir une réaction en chaîne de la polymérase afin de quantifier le nombre de particules virales dans le sang. Le taux de diagnostic est le manque de copies de l'ADN de l'infection.
Description de la méthode de diagnostic
La méthode hautement sensible de diagnostic de l’hépatite B par PCR appartient à la catégorie des études de biologie moléculaire modifiées par génie génétique. Elle est déterminée par la quantité d’ADN viral dans le matériel biologique du patient et par le taux admissible. Selon les résultats obtenus, le nombre de particules virales par unité de volume est établi. Le matériel utilisé pour le test de diagnostic est le sang veineux du patient. Une consommation est souhaitable sur un estomac vide en raison de l'effet possible du sérum chyle sur les résultats de l'étude.
Les résultats obtenus doivent être communiqués au médecin pour interprétation et détermination de la tactique à suivre. Le décodage indépendant ne représente pas la valeur de diagnostic.
La signification du résultat du nombre de particules virales obtenues par la méthode PCR dépasse la valeur des dosages immunoenzymatiques. Étant donné que l'analyse en mode temps réel montre la présence de l'agent responsable de la maladie dans le sang, son contenu en informations est supérieur à celui des autres. Si ELISA n'indique que la présence d'anticorps observés à partir de 4 semaines de la période d'incubation et qui dure plus de 8 semaines après l'élimination du virus du sang, la réaction en chaîne par polymérase confirme clairement l'évolution active de la maladie ou sa guérison, caractérise la dynamique du traitement prescrit.
La réaction en chaîne de la polymérase avec détermination quantitative des particules de l'agent pathogène résout les questions de diagnostic en faveur de l'arrêt du traitement en raison de la récupération ou de la poursuite du traitement en raison de son manque d'efficacité. La méthode est aussi spécifique que possible pour le virus HBV et se distingue par une erreur acceptable.
Indications et objectifs de performance
L'analyse quantitative de l'hépatite B est la plus fiable et vous permet de confirmer les données obtenues par les méthodes ELISA. Il est nommé quand:
- obtention d'un résultat de diagnostic positif par ELISA;
- traiter un patient avec un diagnostic établi de lésion hépatique virale;
- dans le diagnostic d'étiologie mixte d'hépatite;
- si nécessaire, déterminez la charge virale chez un patient.
Étant donné que la méthode de dosage immunoenzymatique est davantage utilisée chez les spécialistes des maladies infectieuses, certains patients atteints d'une maladie bénigne peuvent être traités sans qu'il soit nécessaire de compter la charge virale. Mais la PCR est généralement considérée comme le «gold standard» du diagnostic en hépatologie, car, en raison du caractère unique de son résultat, elle élimine un certain nombre de problèmes d’organisation. Par conséquent, la direction du patient pour l'analyse quantitative a les objectifs suivants:
- obtenir des données sur le nombre de particules virales dans le sang du patient;
- confirmation du cours aigu de l'hépatite et vérification rapide de la maladie chronique;
- détection constante des porteurs de virus latents avec des tests ELISA positifs, surveillance de leur virémie;
- décider de la nomination d'un traitement antiviral, de sa combinaison et de sa cessation.
L'objectif le plus important de l'application d'un test PCR quantitatif pour détecter le VHB est d'identifier les combinaisons possibles de traitement. En cas de charge virale élevée, le résultat de l'analyse donne au spécialiste la possibilité de procéder à l'association des médicaments. Pendant le traitement, il est facile de déterminer l’efficacité du traitement pharmacologique prescrit en fonction du résultat de la PCR. S'appuyant uniquement sur les données des méthodes immunofermentaires, il est impossible de déterminer en temps utile le traitement et son efficacité actuelle. Par conséquent, un test quantitatif en temps réel est une analyse nécessaire avant de commencer le traitement de l'hépatite aiguë, de l'infection virale latente avec une virémie élevée et du VHB chronique.
Interprétation des résultats quantitatifs du test PCR
L'interprétation des résultats du test PCR quantitatif doit être effectuée par le médecin traitant du patient. Il est nécessaire d'évaluer l'indicateur de diagnostic et de déterminer les tactiques thérapeutiques.
Un analyseur standard est capable de produire un indicateur quantitatif qui reflète le nombre de copies d’ADN viral présentes dans le sang veineux étudié. Unités de mesure - copies / ml, UI / ml (copies par millilitre, unités internationales par millilitre). L'interprétation des résultats est donnée dans le tableau avec l'indication des différentes unités de mesure.
Etudes sur le virus de l'hépatite B (ELISA et PCR)
Antigène «s» du virus de l'hépatite B (AgHBs)
L’antigène de surface de l’hépatite B dans le sérum est normalement absent.
La détection de l'antigène de surface de l'hépatite B (HBsAg) dans le sérum confirme l'infection aiguë ou chronique par le virus de l'hépatite B.
En cas de maladie aiguë, l'AgHBs est détecté dans le sérum au cours des 1-2 dernières semaines de la période d'incubation et des 2 ou 3 premières semaines de la période clinique. La circulation sanguine d'HBsAg dans le sang peut être limitée à quelques jours. Vous devez donc vous efforcer de procéder à un premier examen précoce des patients. La méthode ELISA permet de détecter HBsAg chez plus de 90% des patients. Presque chez 5% des patients, les méthodes de recherche les plus sensibles ne détectent pas l’HBsAg; dans de tels cas, l’étiologie de l’hépatite virale B est confirmée par la présence d’anticorps anti-HBcAg JgM ou PCR.
La concentration sérique d’HBsAg dans toutes les formes de sévérité de l’hépatite B au plus fort de la maladie présente une gamme importante de fluctuations, mais il existe une certaine tendance: il existe une relation inverse entre la concentration sérique d’HBsAg et la gravité de la maladie.
Les concentrations élevées d'HBsAg sont plus courantes dans les formes légères et modérées de la maladie. Dans les formes sévères et malignes, la concentration de HBsAg dans le sang est souvent faible et peut ne pas être détectée chez 20% des patients présentant une forme sévère et chez 30% avec un antigène malin dans le sang. L’apparition de ce type de cancer chez les patients présentant des anticorps anti-AgHBs est considérée comme un signe diagnostique défavorable; il est déterminé dans les formes malignes de l'hépatite B.
Au cours de l'évolution aiguë de l'hépatite B, la concentration de HBsAg dans le sang diminue progressivement jusqu'à la disparition complète de cet antigène. HBsAg disparaît chez la plupart des patients dans les 3 mois suivant le début d'une infection aiguë.
En règle générale, une diminution de la concentration en AgHBs de plus de 50% à la fin de la 3ème semaine de la période aiguë indique une phase d'achèvement du processus d'infection. Habituellement, chez les patients présentant une concentration élevée d'AgHBs au plus fort de la maladie, il est détecté dans le sang pendant plusieurs mois.
Chez les patients présentant de faibles concentrations d'HBsAg, il disparaît beaucoup plus tôt (parfois plusieurs jours après le début de la maladie). En général, le temps de détection de l’HBs HB varie de quelques jours à 4-5 mois. La période maximale de détection de l'AgHBs accompagnée d'une progression régulière de l'hépatite B aiguë ne dépasse pas 6 mois à compter du début de la maladie.
HBsAg peut être trouvé chez les personnes en bonne santé, en règle générale, dans les études prophylactiques ou accidentelles. Dans de tels cas, d'autres marqueurs de l'hépatite virale B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti-HBeAg, sont examinés et la fonction hépatique est étudiée.
En cas de résultats négatifs, des études répétées sur HBsAg sont nécessaires.
Si des analyses de sang répétées pendant plus de 3 mois révèlent l'HBsAg, ce patient est classé dans la catégorie des patients atteints d'hépatite B chronique.
La présence d'HBsAg est assez courante. Il y a plus de 300 millions de transporteurs dans le monde et environ 10 millions dans notre pays.
L’arrêt de la circulation de l’HBsAg avec séroconversion ultérieure (formation d’anti-HBs) indique toujours une récupération - une purification du corps.
Un test sanguin pour la présence d'HBsAg est utilisé aux fins suivantes:
- période d'incubation;
- maladie aiguë;
- relèvement précoce;
- hépatite chronique persistante;
- cirrhose du foie;
pour le dépistage et l'identification des patients dans les groupes à risque:
Évaluation des résultats de recherche
Les résultats de l'étude sont exprimés qualitativement - positif ou négatif. Un résultat négatif indique l'absence d'HBsAg sérique. Un résultat positif - l'identification d'HBsAg indique une incubation ou une période aiguë d'hépatite virale B aiguë, ainsi que d'hépatite virale B chronique.
Anticorps contre l'antigène nucléaire du virus de l'hépatite B JgG (anti-HBcAg JgG)
Normalement, le sérum anti-HBcAg est absent du sérum.
Chez les patients présentant un anti-HBcAg, JgG apparaît dans la période aiguë de l'hépatite virale B et persiste toute la vie. Anti-HBcAg JgG est le principal marqueur du VHB transféré.
Les tests sanguins pour l'anti-HBcAg JgG sont utilisés pour diagnostiquer:
Évaluation des résultats de recherche
Le résultat de l'étude est exprimé qualitativement - positif ou négatif. Un résultat négatif indique l'absence de sérum anti-HBcAg JgG. Un résultat positif - l'identification de l'anti-HBcAg JgG indique une infection aiguë, une convalescence ou une hépatite virale B déjà transférée.
Antigène "e" du virus de l'hépatite B (AgHBe)
Normalement, HBeAg dans le sérum est absent.
L’HBeAg peut être retrouvé dans le sérum de la plupart des patients atteints d’hépatite B virale aiguë. Il disparaît généralement dans le sang avant l’antigène HBs. Un taux élevé d'AgHBe dans les premières semaines de la maladie ou sa détection pendant plus de 8 semaines donne à penser qu'il existe une infection chronique.
Cet antigène est souvent détecté dans les cas d'hépatite active chronique d'étiologie virale. La définition de HBeAg présente un intérêt particulier dans le fait que sa détection caractérise la phase de réplication active du processus infectieux. Il a été établi que des concentrations élevées d'HBeAg correspondent à une activité élevée de l'ADN polymérase et caractérisent la réplication active du virus.
La présence d’HBeAg dans le sang indique sa grande infectivité, c’est-à-dire la présence d’une infection active par le virus de l’hépatite B dans le corps examiné et n’est détectée qu’en présence d’antigène HBs dans le sang. Chez les patients atteints d'hépatite chronique active, les médicaments antiviraux ne sont utilisés que si l'AgHBe est détecté dans le sang. HBeAg - antigène - un marqueur de la phase aiguë et de la réplication du virus de l'hépatite B.
Un test sanguin pour la présence d'antigène HBe est utilisé pour diagnostiquer:
Évaluation des résultats de recherche
Le résultat de l'étude est exprimé qualitativement - positif ou négatif. Un résultat négatif indique l'absence d'AgHBe sérique. Un résultat positif - la détection de HBeAg indique une incubation ou une période aiguë d'hépatite virale B aiguë ou la réplication continue du virus et l'infectiosité du patient.
Anticorps anti-antigène "e" du virus de l'hépatite B (anti-HBeAg)
L'anti-HBeAg dans le sérum est normalement absent. L'apparition d'anticorps anti-HBeAg indique généralement une élimination intensive du virus de l'hépatite B du corps et une infection mineure du patient.
Ces anticorps apparaissent dans la période aiguë et persistent jusqu'à 5 ans après l'infection. Dans l'hépatite chronique persistante, l'anti-HBeAg est présent dans le sang du patient avec l'HBsAg. Séroconversion, c'est-à-dire la transition de HBeAg en anti-HBeAg, avec hépatite chronique active, le plus souvent pronostiquement favorable, mais la même séroconversion n'améliore pas le pronostic de la transformation hépatique cirrhotique sévère.
Les analyses de sang pour la présence d'anti-HBeAg sont utilisées dans les cas suivants pour le diagnostic de l'hépatite virale B:
Évaluation des résultats de recherche
Le résultat de l'étude est exprimé qualitativement - positif ou négatif. Un résultat négatif indique l'absence d'anticorps anti-HBeAg dans le sérum. Un résultat positif est la détection des anticorps anti-AgHBe, ce qui peut indiquer le stade initial de l'hépatite virale aiguë B, la période d'infection aiguë, le stade précoce de la convalescence, la convalescence, l'hépatite virale B récemment transférée ou l'hépatite B persistante.
Les critères de présence de l'hépatite B chronique sont les suivants:
Détection du virus de l'hépatite B par PCR (qualitativement)
Le virus de l'hépatite B dans le sang est normalement absent.
La détermination qualitative du virus de l'hépatite B par la méthode PCR dans le sang permet de confirmer la présence du virus dans le corps du patient et d'établir ainsi l'étiologie de la maladie.
Cette étude fournit des informations utiles pour le diagnostic de l’hépatite virale aiguë B au stade de l’incubation et du développement précoce de la maladie, lorsque les principaux marqueurs sérologiques du patient dans le sang peuvent être absents. L'ADN viral sérique est détecté chez 50% des patients en l'absence d'HBeAg. La sensibilité analytique de la méthode PCR n’est pas inférieure à 80 particules virales dans 5 µl, dernier échantillon de détection d’ADN, spécificité: 98%.
Cette méthode est importante pour diagnostiquer et surveiller l'évolution du VHB chronique. Environ 5 à 10% des cas de cirrhose et d'autres maladies hépatiques chroniques sont causés par un porteur chronique du virus de l'hépatite B. Les marqueurs de l'activité de ces maladies sont la présence d'AgHBe et de l'ADN du virus de l'hépatite B dans le sang.
La méthode PCR permet de déterminer dans le sang l'ADN du virus de l'hépatite B de manière qualitative et quantitative. Le fragment déterminé dans les deux cas est la séquence unique d'ADN du gène de la protéine structurale du virus de l'hépatite B.
La détection de l'ADN du virus de l'hépatite B dans un biomatériau par PCR est nécessaire pour:
La disparition de l'ADN de l'hépatite B dans le sang témoigne de l'efficacité du traitement.
Détection du virus de l'hépatite B par PCR (quantitative)
Cette méthode fournit des informations importantes sur l'intensité du développement de la maladie, l'efficacité du traitement et le développement de la résistance aux médicaments actifs.
Pour le diagnostic de l'hépatite virale par PCR dans le sérum, on utilise des systèmes de test dont la sensibilité est de 50 à 100 copies dans l'échantillon, ce qui permet la détection du virus à une concentration de 5 X 10 ^ 3 -10 ^ 4 copies / ml La PCR dans l'hépatite virale B est absolument nécessaire pour juger de la réplication virale.
L'ADN viral sérique est détecté chez 50% des patients en l'absence d'HBeAg. Le sérum sanguin, les lymphocytes et l'hépatobiopsie peuvent servir de matériel de détection de l'ADN du virus de l'hépatite B.
- L'évaluation du niveau de virémie est la suivante:
- moins de 2,10 ^ 5 copies / ml (moins de 2,10 ^ 5 UI / ml) - virémie faible;
- de 2,10 ^ 5 copies / ml (2,10 ^ 5 UI / ml) à 2,10 ^ 6 copies / ml (8,10 ^ 5 UI / ml) - virémie moyenne;
- plus de 2.10 ^ 6 copies / ml - virémie élevée.
Il existe une relation entre l’issue de l’hépatite virale aiguë B et la concentration d’ADN du VHB dans le sang d’un patient. Avec un faible niveau de virémie, le processus de chronisation de l'infection est proche de zéro, avec une moyenne, le processus est synchronisé chez 25 à 30% des patients et avec un niveau élevé de virémie, l'hépatite virale aiguë B devient le plus souvent chronique.
Les indications pour le traitement de l'interféron alpha chronique du VHB doivent être considérées comme la présence de marqueurs de la réplication virale active (détection du VHB, de l'AgHB et de l'ADN du VHB dans le sérum sanguin au cours des six mois précédents).
Les critères d'évaluation de l'efficacité du traitement sont la disparition de HBEAg et de l'ADN du VHB dans le sang, qui s'accompagne généralement d'une normalisation du taux de transaminases et d'une rémission à long terme de la maladie. L'ADN du VHB disparaît du sang au bout de 5 mois de traitement chez 80% des patients. La réduction du niveau de virémie de 85% ou plus le troisième jour suivant le début du traitement par rapport au début du traitement constitue un critère rapide et assez précis pour prédire l'efficacité du traitement.
Analyse PCR pour l'hépatite B
Le virus à ADN de la famille des Hepadnaviridae est l'agent causal direct de l'hépatite B. L'analyse par PCR de l'hépatite B permet de détecter la présence d'un virus à ADN infecté dans le sang d'un patient. Le résultat d’un type positif sur l’ADN du VHB démontre la présence d’une infection dans le sang du patient. Il convient de noter que le diagnostic par l’utilisation de l’analyse par PCR permet non seulement de déterminer la présence d’une infection, mais aussi sa charge et son activité quantitatives. Cette méthode est fiable, précise et reproductible. La quantification de l'ADN du VHB avec la qPCR peut être utilisée pour surveiller l'efficacité du traitement du VHB et être utile pour comprendre l'histoire naturelle du VHB dans une zone d'endémie.
Le processus d'infection par l'hépatite B se produit par contact domestique ou sexuel - par contact direct avec du sang infecté. Après infection, le virus pénètre dans les cellules du foie, dans lesquelles il poursuit sa reproduction active. Dans le sang, les cellules pathogènes se propagent dans tout le corps. Il convient de noter que les cellules de l'hépatite B sont très résistantes à l'acide et aux températures élevées. Il est capable de maintenir ses propriétés dommageables pendant six mois.
Types de PCR pour l'hépatite B
À ce jour, deux types de diagnostics sont prescrits si vous suspectez la présence du virus de l'hépatite B: la PCR qualitative (vous permet de déterminer avec une précision de 100% la présence du virus dans le sang) et la PCR quantitative (vous permet de déterminer le degré d'activité du virus).
Une PCR de haute qualité est prescrite s'il existe une suspicion d'infection par le VHB ou si d'autres méthodes de diagnostic n'ont pas donné de résultats clairs. Ce type d'analyse PCR est extrêmement facile à déchiffrer: négatif (aucun virus détecté dans le sang), positif (virus détecté dans le sang). La principale tâche de l'analyse qualitative est de déterminer la présence de cellules infectées aux premiers stades de la maladie. Si le virus a été diagnostiqué deux semaines après l'infection présumée, l'efficacité du traitement sera beaucoup plus grande. Si le virus dans le sang est d'environ deux mois, la maladie devient chronique et ne peut donc pas être complètement guérie.
Si un diagnostic qualitatif confirme la présence de VHB dans le sang, le médecin vous prescrit une analyse quantitative.
L'analyse quantitative vous permet de déterminer l'activité du développement du virus chez le patient. Ce type d'analyse PCR est attribué à:
- déterminer le stade de la maladie;
- surveiller l'efficacité de la thérapie appliquée;
- déterminer le niveau de résistance du virus à un médicament particulier;
- pour la sélection des médicaments.
Les indicateurs quantitatifs du virus dans le sang sont mesurés en UI par millilitre ou en ADN par millilitre.
Si le médecin prescrit un diagnostic quantitatif immédiatement, sans vérifier le qualitatif, 75 UI par millilitre sont considérés comme la norme. Si moins d'unités internationales sont détectées, le résultat est que le VHB n'est pas détecté lorsque les chiffres sont au-dessus de la normale, la présence d'une hépatite virale B est diagnostiquée.
Interprétation du diagnostic quantitatif
Les indicateurs suivants (en copies / millilitre) sont considérés comme la norme de la CRP dans l'hépatite B: moins de 10 3 - virus inactif; de 10 4 à 10 5 - le virus est généralement inactif; 10 6 - virus actif; 10 7 - un virus très actif.
Sur la base d’indicateurs quantitatifs, il est possible de déterminer avec une précision de 100% la forme de la maladie (porteuse, aiguë ou chronique), la réaction du virus au traitement, le besoin de diagnostics supplémentaires.
La forme chronique de l'hépatite B est établie si l'activité du virus est de 10 5 copies par millilitre. Un transporteur est diagnostiqué si les scores sont inférieurs à 10 5 copies par millilitre.
Au cours de la période de traitement, il est nécessaire de répéter régulièrement (tous les trois mois) les diagnostics quantitatifs afin de prendre en compte à temps la période au cours de laquelle le virus développe une immunité aux médicaments utilisés et modifie la méthode. Si toutes les études ont été effectuées correctement et qu'un traitement efficace a été sélectionné, une analyse répétée (après trois jours de traitement) montrera une diminution de l'activité des cellules pathogènes d'au moins quatre-vingt-cinq pour cent.
Une biopsie du foie n’est pratiquée que lorsque, après six mois de traitement, les taux d’ALAT sont deux fois plus élevés que la normale et que le diagnostic par PCR indique des taux inférieurs à 10 5 copies par millilitre de sang.
Se préparer pour l'enquête
Le sang veineux est requis pour l'analyse. Pour obtenir les résultats les plus précis possible, il est nécessaire de se préparer à la procédure: refuser de prendre de la nourriture au moins huit heures avant le prélèvement de sang; pendant deux jours pour refuser un traitement médicamenteux (il est impératif d'avertir le médecin de la prise du médicament); vous devez rester au repos vingt minutes avant de donner du sang; Douze heures avant la procédure, abandonnez les exercices sportifs, les boissons alcoolisées, le tabagisme et la consommation d'aliments gras.
C'est important: si le diagnostic est nécessaire pour un enfant de moins de cinq mois, il doit donner un verre d'eau bouillie toutes les dix minutes, soixante minutes avant la procédure de prélèvement du sang.
En résumé
L'analyse par PCR de l'hépatite B aujourd'hui est la méthode la plus précise pour diagnostiquer un virus. La méthode permet de déterminer les formes mutées et cachées de la maladie, de diagnostiquer la maladie dès les premiers jours de l’infection et donc de choisir le traitement le plus efficace. L'assistant de laboratoire compare les résultats de l'analyse à la norme, puis les amène à la conclusion. Les données sont traitées dans les deux semaines. Afin d'obtenir une référence pour une analyse PCR, il est nécessaire de contacter un hépatologue, un spécialiste des maladies infectieuses ou un virologue. Il est important de se rappeler que plus vite vous obtiendrez les résultats avec le médecin, plus le traitement sera efficace.
Explication de la PCR et analyse biochimique de l'hépatite
L'hépatite est un processus inflammatoire dans le foie résultant de la destruction de ses cellules par des substances toxiques. Décrypter l'analyse de l'hépatite permet de juger objectivement de l'état de santé d'un patient souffrant d'une maladie du foie. Le médecin spécialiste des maladies infectieuses vous expliquera comment comprendre les résultats de l’étude et vous prescrira un traitement supplémentaire. Le patient, après avoir étudié de manière indépendante les données obtenues, tire certaines conclusions qui ne correspondent pas toujours à la réalité.
Le virus de l'hépatite B est contenu dans le sérum et des méthodes spécifiques de diagnostic en laboratoire permettent la détection d'antigènes pathogènes et d'anticorps dirigés contre lui.
Liste des tests d'hépatite
Le diagnostic d'inflammation hépatique virale est confirmé par des études spéciales. Avant de suivre un traitement, le patient est testé:
- Le patient fournit du sang pour les recherches le matin, entre 7 heures et 9 heures. Le patient doit s'abstenir de manger pendant 12 heures. L'analyse quantitative de l'hépatite B détermine la présence du virus et du titre des anticorps dans le sérum. Dans le même temps, le médecin prescrit une étude qui identifie l'ADN du VHB à l'aide de réactions PCR.
- Chez les patients infectés, la présence de la protéine IgG anti-HBc et de l'antigène HBsAg est établie. Une immunoglobuline spécifique indique une augmentation rapide de la concentration de virus de l'hépatite dans le sérum du patient. En cas de test négatif pour anti-HBc, IgG est une recherche supplémentaire sur la présence d'autres maladies.
- En étudiant la période de maladie aiguë, déterminez les immunoglobulines HBeAg et Anti-HBc IgM. L'établissement du diagnostic correct n'est possible qu'après confirmation de la découverte de l'ARN viral - l'hépatite est confirmée par la méthode de la biologie moléculaire.
- La PCR est largement utilisée pour le diagnostic de la maladie du foie - une méthode quantitative vous permet de prescrire un traitement efficace de l'hépatite.
Étude immunologique
Pour établir la capacité du patient à faire face à un virus dangereux, diagnostiquez le niveau de résistance du corps. En raison de l’ensemble des études de laboratoire, des indicateurs quantitatifs et qualitatifs des facteurs immunologiques sont établis - anticorps anti-hépatite B.
La protéine HBsAg est un antigène de surface qui est un composant de la supercapside (enveloppe virale) de l'agent pathogène. Sa fonction principale est la participation au processus d'adsorption du virus par des cellules hépatiques saines. Le peptide HBsAg est résistant aux facteurs environnementaux - alcali (Ph = 10), solution à 2% de chloramine et phénol.
Le marqueur HBsAg est présent dans le sérum d'une personne infectée. Immédiatement après son apparition, l'ARN ne traduit pas seulement sa synthèse, mais contient également des particules de noyau Ar du marqueur précédent. C'est la preuve du développement de la phase active de l'hépatite.
La présence d'HBeAg chez un patient chronique indique le début du stade actif du processus infectieux.
Le marqueur anti-HBc contient 2 types d'anticorps - IgG et IgM. Ceci est une protéine spécifique à un antigène. La forme aiguë de la maladie est caractérisée par la présence d’Anti-HBc et d’IgM. Leur valeur positive indique une maladie hépatique antérieure.
Analyse quantitative
Pour déterminer l'activité du pathogène prescrire une analyse PCR. Il définit le niveau de charge virale et les chances de guérison du patient. La réaction en chaîne de la polymérase est effectuée après la fin de la période de latence. Dans le processus de recherche, non seulement HBsAg est déterminé, mais également le marqueur HBeAg.
Le décodage de l'analyse PCR de l'hépatite vous permet de déterminer le degré d'activité du processus pathologique et l'efficacité du traitement complexe.
Le médecin détermine dans quelle mesure le corps du patient est sensible aux médicaments antiviraux et si des mesures peuvent être prises pour éliminer les causes de la maladie chronique du foie. Dans ce cas, l'indice de transaminase augmente et l'indice d'activité de l'agent causal est plusieurs fois supérieur à l'indice normal, la concentration en acides aminés est supérieure à 106 copies d'ADN par ml.
La norme de transaminases dans le sang correspond aux valeurs des enzymes AsAT et AlAT. L'alanine aminotransférase chez les femmes ne dépasse pas 32 U / l et chez les hommes - 40 U / l. La concentration du virus chez les personnes infectées à un âge précoce est de 100 000 copies par ml.
Dans la phase inactive du virus et dans le cas de l'Anti-HBc, l'ADN du VHB se situe dans la plage de 2 000 UI / ml et le nombre de copies ne dépasse pas 10 000.
Méthode d'hybridation moléculaire
La réponse ELISA à l'hépatite détermine le type d'antigène avec des anticorps et des enzymes. La recherche échelonnée est acceptable, mais seul un spécialiste qui a reçu le résultat de l'analyse à temps peut poser le bon diagnostic.
Les marqueurs de l'hépatite virale lors du dosage immunologique sont HBsAg, IgM anti-Hbcor. Au début de la maladie, ils sont élevés: PPBR-1.55, OPcr-0.27, HBsAg = 1,239, l’ADN du virus n’est pas détecté. Après traitement, le résultat de l'analyse indique une diminution de HBsAg à 1,07 et HBeAg devient négatif. L'ADN du virus est présent.
Si les valeurs d'IgM, d'IgG, d'IgA sont négatives, il est nécessaire de déterminer si la maladie est absente ou si une guérison complète a eu lieu.
Une valeur d'IgG positive indique une immunité complètement formée. Dans ce cas, les IgM ne sont pas détectés. Il est important de savoir qu’une étude sur l’hépatite révèle un titre élevé en IgM.
Dans la période aiguë de la maladie, des valeurs d'IgG négatives apparaissent. La rémission d'une maladie virale est accompagnée d'une IgM d'immunoglobuline négative. ELISA est relativement simple et sans danger pour la santé du patient.
Test sanguin biochimique
L'étude du sérum identifie la pathologie dans le corps, spécifie le diagnostic, permet d'évaluer le travail du foie et d'obtenir des informations sur le métabolisme. L'analyse biochimique est effectuée le matin. Pour la recherche utilisant des matériaux dérivés du sang veineux.
Il est important de suivre les règles de préparation du test de dépistage de l'hépatite C - dans ce cas, le décodage de tous les indicateurs ne sera pas faussé. La bilirubine totale est normalement comprise entre 8,55 et 20,2 mmol / l et son augmentation indique l’apparition d’une maladie du foie. Les valeurs d'AlAT et d'AsAT augmentent également dans le cas de l'hépatite B.
L'albumine chez un patient en bonne santé est comprise entre 35 et 55 g / l. Les faibles taux de protéines plasmatiques indiquent une inflammation virale du foie.
L’indice LDH normal est compris entre 125 et 250 U / l. Sa croissance signifie la déformation et la destruction des cellules de l’organe malade. L'indicateur de LDH (sorbitol déshydrogénase) indique l'état du tissu hépatique. La valeur normale est 0–1 U / l. Le taux de croissance est une composante caractéristique de l'évolution aiguë de l'hépatite B ou de son passage au stade chronique.
La protéine GGG a une faible activité dans le plasma sanguin.
Sa croissance s'observe dans l'inflammation du foie et persiste longtemps. Normale - 25–49 U / l chez les hommes, chez les femmes, l'indicateur est nettement plus bas - 15–32 U / l.
Décodage des signes chroniques d'hépatite B
L'identification des marqueurs de la maladie du foie est la tâche principale du médecin, qui cherche à éviter les erreurs de diagnostic. Il est important de savoir que les facteurs physiologiques suivants affectent le résultat de l'analyse:
Une table d'antigènes et leur décodage permettront au patient de se faire une idée de la nature de la maladie.
Types de PCR pour l'hépatite B et interprétation des résultats
La réaction en chaîne de la polymérase est un type de test sanguin capable de détecter avec précision le virus de l'hépatite B. Cette méthode permet notamment de dépister le VHB à un stade précoce - un mois après l'infection, alors qu'un antigène spécifique n'est détecté chez un patient qu'après 2 mois.. La PCR peut détecter non seulement un virus à ADN normal, mais également des souches mutantes qu'aucune autre analyse ne peut identifier.
Lors du décodage de la PCR pour l'hépatite B, les résultats sont comparés aux valeurs standard. Sur cette base, des conclusions sont tirées sur la présence de la maladie (résultat positif), la concentration du virus (activité) ou l'absence de la maladie (résultat négatif). Le traitement des données est de 2 semaines.
Types de PCR pour l'hépatite virale B
Il existe 2 types de diagnostics prescrits pour l'hépatite B. La PCR de haute qualité permet, avec une précision de 100%, de dire si le VHB est dans le sang ou non. La PCR quantitative montre l’activité du virus, c’est-à-dire la quantité d’ADN du VHB contenue dans 1 ml de sang.
PCR de haute qualité et son interprétation
Un test sanguin de PCR pour l'hépatite B ne peut détecter que la présence de fragments d'ADN. Nommé dans le cas où le patient soupçonne une infection par le VHB (VHB) ou lorsque d’autres méthodes de diagnostic, par exemple, des tests sérologiques ne donnent pas de réponse claire. Décoder les résultats lors d’une analyse qualitative est très simple:
- résultat négatif - pas de virus;
- résultat positif - virus détecté.
La PCR de haute qualité a pour but de confirmer ou d'infirmer la présence du virus de l'hépatite B, ainsi que d'effectuer un diagnostic précoce. Si le VHB est détecté dans les 1-2 semaines suivant l'infection, le traitement sera aussi efficace que possible. Avec le développement actif du VHB pendant 2 mois et plus, la maladie devient chronique et ne peut pas être complètement guérie.
Dans le cas où la présence d'un virus indique une PCR de haute qualité pour l'hépatite, l'étape suivante consiste à effectuer un diagnostic quantitatif.
PCR quantitative
Pour que le traitement soit efficace ou que les résultats du traitement soient évalués, il ne suffit pas de savoir que le patient est atteint du VHB. Il est nécessaire de quantifier la valeur de l'ADN du virus de l'hépatite B dans 1 ml de sang, c'est-à-dire la charge virale du corps. Ce type de PCR pour l'hépatite B est réalisé dans les cas suivants:
- Avant de prescrire un traitement.
- Évaluer l'efficacité du traitement.
- Déterminer le développement de la résistance du virus aux médicaments pris.
- Déterminer le stade où se situe la maladie.
L'unité de mesure d'un virus est l'unité internationale (UI / ml) ou le nombre de copies d'ADN / ml, c'est-à-dire le nombre de fragments d'ADN par 1 ml de sang. Le rapport entre les deux unités dépend du système de test sélectionné et va de 2 à 7 copies / ml en 1 UI / ml. Si le système est inconnu, la valeur moyenne est utilisée pour la conversion:
1 UI / ml = 5 copies / ml
Si une analyse quantitative est effectuée immédiatement, le taux marginal de diagnostic de la maladie est de 75 UI / ml. Lorsque le résultat est supérieur à cet indicateur, le diagnostic de VHB est établi, en dessous de - VHB n'est pas détecté.
Traitement de la PCR quantitative
Dans l'hépatite B, les valeurs de la charge virale (virémie) suivantes, copies / ml, correspondent aux normes de la PCR:
- 10 ^ 5 copies / ml. Lorsque, avec une activité virale importante, il y a une augmentation du niveau d'ALAT plus souvent 2 fois en six mois, un traitement antiviral est immédiatement prescrit.
Pour savoir comment l'hépatite à ADN se comportera en termes de chronicité, c'est-à-dire de transition de la forme chronique à la forme aiguë, les résultats du diagnostic PCR sont également utilisés:
- L’ADN du VHB de 2 x 10 ^ 6 copies / ml signifie que l’acquisition de la forme chronique de la maladie est inévitable.
Se préparer pour l'enquête
Pour déterminer la présence du VHB par PCR, le sang est prélevé dans une veine. La procédure est toujours strictement pratiquée à jeun et il est préférable de se rendre au laboratoire le matin, lorsque le temps de repos naturel après un repas est de 8 heures. Pour que les résultats de l'examen soient corrects, il est nécessaire de savoir à l'avance comment se préparer pour se rendre correctement à la clinique. Les étapes supplémentaires sont les suivantes:
- Refus des aliments gras, du tabac, de l'alcool et des sports 12 heures avant la procédure.
- Reposez-vous pendant 20 minutes immédiatement avant de donner du sang.
- Avant de commencer la procédure, l’infirmière doit être prévenue des médicaments pris.
Attention! Si le diagnostic est posé à un enfant de moins de 5 ans, alors, une demi-heure avant la procédure, il devrait boire 1 verre d’eau bouillie toutes les 10 minutes.
En résumé
À ce jour, le diagnostic PCR pour la détection de l'hépatite B est la méthode la plus précise. La méthode vous permet de voir les formes cachées et mutées de la maladie, d'identifier la maladie dans les premières semaines après l'infection et, par conséquent, de mener un traitement efficace. En fonction de la situation, une PCR qualitative ou quantitative est réalisée, visant à détecter le VHB et à établir son activité. Pour être testé, vous devez contacter un virologue, un spécialiste des maladies infectieuses ou un hépatologue.
L'essence de l'analyse de la PCR pour l'hépatite B et ses résultats
L’hépatite virale B est traitée avec succès si elle est détectée à temps et si le nombre d’anticorps et d’antigènes dans le sang du patient est correctement déterminé. À l'aide d'un dosage immunologique enzymatique de l'hépatite, il est possible de détecter la présence de marqueurs viraux, mais ils ne peuvent pas déterminer le stade exact du processus.
Pour l’évaluation quantitative, utilisez le diagnostic PCR. En utilisant le test, il est possible de compter le nombre de marqueurs, de prédire l'évolution de la maladie et la probabilité de guérison à l'aide de médicaments antiviraux.
Le principal avantage de cette étude est sa capacité à détecter des concentrations, même minimes, du virus, à identifier l'agent pathogène au stade de l'espèce.
Diagnostic de l'hépatite B
Le virus de l'hépatite B est hautement contagieux et résistant aux influences externes. Il reste actif dans le sang d'un patient pendant plusieurs semaines. Par conséquent, chaque personne présente un risque d'infection, même si une prophylaxie est observée.
Pour diagnostiquer la maladie, prescrire les études suivantes:
L'essence de la méthode PCR
Le chimiste américain K. Mullis a reçu le prix Nobel et sa méthode de diagnostic est toujours utilisée.
L'ancêtre de la méthode PCR (réaction en chaîne de la polymérase) est considéré comme un scientifique norvégien H. Kleppe. Il a commencé par réaliser l'amplification (récupération) de l'ADN en utilisant une chaîne courte d'ADN, c'est-à-dire un amorce synthétique (une sorte de copie).
Cependant, le scientifique n'a pas réussi à réaliser son idée. Des études similaires ont été réalisées par le chimiste américain K. Mullis, qui a reçu en 1993 le prix Nobel pour son invention. Depuis lors, la PCR a été utilisée pour établir la paternité, diagnostiquer des maladies génétiques et détecter les virus.
L’essence de la réaction est qu’avec l’aide d’enzymes un certain ADN est copié. Vous pouvez uniquement copier la zone qui correspond aux paramètres spécifiés et si elle se trouve dans l'exemple présenté. Les composants suivants sont utilisés pour démarrer la réaction:
- ADN matriciel avec un site à copier.
- Les amorces ont une structure similaire à celle de l'ADN.
- La polymérase, c’est-à-dire l’enzyme qui déclenche la réaction. Il devrait être thermostable, c'est-à-dire résister aux températures extrêmes.
- Solution avec certains paramètres, assurant le passage de la réaction.
La réaction s'effectue en plusieurs étapes:
Pour la détection de l'hépatite B, deux types de réactions sont utilisés: quantitatif et qualitatif.
PCR quantitative
La méthode quantitative détermine la quantité de génome du VHB
La PCR quantitative implique la création simultanée de copies de fragments d'ADN et la détermination du nombre de molécules. La mesure est effectuée après chaque étape, c'est-à-dire en temps réel. Ceci est réalisé en utilisant des sondes fluorescentes, qui sont incluses dans une chaîne de molécules et brillent au cours d'une certaine période de l'étude.
Cette méthode est utilisée pour détecter des fragments d’ADN qui sont des marqueurs du virus de l’hépatite. En utilisant la méthode quantitative, il est possible d’isoler avec précision le génotype du virus. En d'autres termes, le nombre de copies du génome du VHB par nombre de cellules du patient est calculé.
L'analyse quantitative apporte des réponses aux questions suivantes:
- Avec quelle intensité la maladie progresse.
- Quelle est l'efficacité du traitement?
- La résistance aux médicaments s'est-elle développée?
De plus, une mesure quantitative est nécessaire pour le diagnostic du stade d'infection chronique. Si la quantité d'ADN est inférieure à 100 pcs / ml au niveau normal de transaminase, alors la personne est porteuse du virus.
Dans la phase aiguë, la quantité d'anticorps est beaucoup plus élevée et, dans le traitement antiviral, une augmentation du nombre d'anticorps indique le développement d'une pharmacorésistance, ce qui est un signal pour ajuster le traitement.
PCR de haute qualité
La PCR de haute qualité donne moins d’informations mais peut éliminer l’infection.
Une PCR de haute qualité ne peut établir que la présence de l'agent pathogène dans le sang. S'ils sont absents, le patient n'est pas infecté et si l'agent pathogène pénètre dans le sang, le résultat sera positif.
Cependant, avec l'aide de la réaction qualitative, il est impossible de clarifier le génome du virus, le stade de la maladie. Par conséquent, pour le diagnostic du VHB effectué des mesures quantitatives et qualitatives.
Se préparer pour l'enquête
Le sang veineux est requis pour l'analyse PCR. Cela doit être fait le matin à jeun.
Le patient doit bien préparer son étude:
- Pendant 10 heures pour refuser la nourriture, vous ne pouvez boire que de l’eau propre.
- À la veille d'arrêter de prendre de l'alcool, pendant 4 heures pour ne pas fumer.
- Avant l'examen, évitez le stress physique et émotionnel.
- Arrêtez d'utiliser les médicaments pendant 2 jours. Si cela n'est pas possible, vous devez en informer le technicien de laboratoire. Certains médicaments ont un effet sur le résultat final.
Interprétation des données
Dans une réaction quantitative, les indicateurs obtenus sont évalués en fonction du nombre de copies d'ADN.
Il est facile d'interpréter les données de mesure de qualité. Il donne une réponse positive ou négative.
Dans une réaction quantitative, il est possible d'évaluer les indicateurs obtenus en fonction du nombre de copies d'ADN. L'unité de mesure est le nombre de copies / ml.
Les données sont décodées comme suit:
- Si la quantité d'ADN du VHB est inférieure à 90, l'infection est alors absente. Le patient a développé une immunité post-vaccination ou il a été guéri de la maladie.
- Quand le nombre de copies 2x100 parle du porteur du virus.
- Le nombre 2x106 indique un stade chronique de la maladie.
- Avec un ADN supérieur à 2x109, le patient présente un stade aigu d'hépatite.
Résultats erronés
Les avantages de la méthode de diagnostic utilisant des réactions de polymérase sont les suivants:
- Détection directe des agents pathogènes. En revanche, le test ELISA fournit des informations sur la présence d’anticorps dirigés contre le virus.
- Spécificité C'est-à-dire que c'est la région de l'ADN présente dans l'échantillon de biomatériau qui est copiée.
- Hypersensibilité. La méthode peut même détecter des fragments de cellules individuelles.
- Diagnostic des maladies aux stades aigu et latent. Autrement dit, il est possible de diagnostiquer la maladie au stade des manifestations précliniques.
La méthode a des défauts qui conduisent à de faux résultats. L'inconvénient le plus important est la probabilité de contamination du matériau. Les éprouvettes mal traitées, les aiguilles de laboratoire et les réactifs constituent la principale source de contamination.
Une partie de l'ADN d'une réaction précédente peut pénétrer dans le sang. Par conséquent, des exigences sanitaires accrues sont imposées aux laboratoires: salles séparées, tubes en plastique, traitement ultraviolet des laboratoires, etc.
De faux résultats négatifs peuvent être dus à une sensibilité réduite de la réaction. Cela se produit dans les situations suivantes:
- le patient prend des médicaments, par exemple des anticoagulants;
- la personne a souffert de stress physique avant l'analyse (sport, travail dur);
- l'infection est survenue récemment.
Si le patient a une probabilité d'infection élevée et que le résultat de l'étude est négatif, il doit être réexaminé.
Voir aussi:
Conclusion
La méthode de réaction en chaîne de la polymérase est la principale et la plus informative pour le diagnostic du VHB. Cela permet non seulement d'établir le statut de porteur de l'infection, mais aussi de préciser le stade de la maladie et d'évaluer les résultats du traitement.
Pour un diagnostic plus précis, une mesure qualitative et quantitative est utilisée. Les inconvénients de la méthode incluent la probabilité de contamination, une sensibilité réduite et un prix plutôt élevé.
Pour que les résultats soient plus fiables, il faut bien préparer l’étude et la mener à la clinique avec la licence appropriée et une bonne réputation.
ADN de l'hépatite B et PCR
Les tests ADN et la PCR du virus de l'hépatite B sont les tests les plus sensibles permettant de détecter les traces d'ADN moléculaire dans le foie qui identifient la présence du virus. L’essence de la méthode consiste à copier plusieurs fois un fragment d’ADN appartenant à l’agent responsable de la maladie.
La PCR de type hépatite B est une réaction en chaîne de la polymérase d’un réactif chimique externe avec le matériel biologique à étudier, visant à identifier les molécules d’ADN viral dans le sang et leurs indicateurs quantitatifs par unité de volume. L'analyse est assignée dans les cas suivants:
- si vous présentez des signes d'hépatite B chez un patient;
- pendant les activités de diagnostic pour l'hépatite mixte;
- clarifier l'efficacité de la thérapie.
Pour l'analyse PCR, le sang veineux est recueilli. Avant l'étude, vous devriez vous abstenir de manger environ 8 heures.
Un résultat normal lors de la détection de l'ADN dans un virus est considéré comme «non détecté». Cela signifie que le virus est absent du sang ou que son contenu est insignifiant. Le diagnostic final ne peut être posé que par un spécialiste sur la base d'une analyse biochimique et immunologique complète du plasma sanguin pour le traitement de l'hépatite de type B. Le médecin prescrit un traitement. L'automédication comporte trop de risques.
Un prélèvement sanguin veineux est effectué pour l'analyse PCR.
La méthode PCR permet de détecter l'ADN de l'agent pathogène même avec sa présence minimale dans l'échantillon de sang sélectionné. En outre, l’analyse permet de détecter les antigènes déjà développés pour le virus. Chacun des antigènes indique un stade spécifique de la maladie:
- AgHBs - le virus est présent pour le moment.
- Anti-HBcor - l'agent pathogène est actuellement absent, mais c'était le cas auparavant.
- Anti-HBs - dans le sang, il y a des anticorps contre l'hépatite B (en option: herpès, VIH, chlamydia, mycoplasmose, candidose, tuberculose, encéphalite à tiques et bien d'autres maladies).
Pathologie et ses signes
L'hépatite B ou VHB est une infection virale qui affecte les cellules du foie. Il est dangereux non seulement par une action directe sur le parenchyme de l'organe, ce qui affaiblit la fonction de barrière et l'immunité générale. Des conséquences plus graves sont possibles, telles que la cirrhose du foie et la survenue de néoplasmes malins.
Le VHB est transmis par le sang d'une personne infectée par l'hépatite, par ses excréments, par contact avec les muqueuses, en particulier lors de rapports sexuels, de lésions cutanées, par des seringues non stériles lors d'une transfusion sanguine ou lors d'opérations abdominales. Un nouveau-né peut être infecté par sa mère malade lorsqu'il touche les fissures de ses mamelons.
Les symptômes suivants sont caractéristiques de l'hépatite B:
Fatigue inhabituelle
- fatigue croissante à faible charge;
- fatigue inhabituelle;
- lourdeur dans l'hypochondre droit;
- réduction de l'appétit, des nausées;
- couleur jaune de la peau, sclérotique des yeux;
- les matières fécales lumineuses;
- urine foncée;
- douleur dans les articulations.
La période d'incubation, après laquelle ces symptômes commencent à apparaître, est de un à six mois. C'est la période d'accumulation de cellules virales dans le sang hépatique. Lorsque leur concentration atteint une masse critique, le virus traverse les membranes des hépatocytes et continue à se multiplier à l'intérieur des cellules. En conséquence, des cellules hépatiques meurent et une cirrhose se développe, ce qui, en l'absence de mesures thérapeutiques appropriées, entraîne la mort du patient. Un test sanguin rapide pour la PCR et l'ADN de l'hépatite B permet d'éviter les tests négatifs.
Les indications pour la PCR sont:
- test ADN positif confirmant le diagnostic d'hépatite B;
- hépatite aiguë et chronique;
- hépatite mixte;
- détermination quantitative du virus dans le sérum sanguin;
- développement de tactiques de thérapie efficace.
Préparation à l'analyse
La préparation pour le diagnostic par PCR est déterminée par le type de biomatériau. Donc, le sang et l'urine ne donnent que le matin, l'estomac vide. On prend également des frottis et des éraflures de la région urogénitale. La seule restriction pour les femmes est la menstruation. Le sexe est limité pour les deux sexes à la veille des recherches.
Les résultats de la PCR ne peuvent être considérés fiables que si le patient est correctement préparé à la procédure. Cette étude implique les conditions suivantes:
- plein de confort spirituel, l'absence de toute excitation. Pour que cette analyse puisse être transmise même à la maison. Il est seulement nécessaire d'appeler un médecin avec l'équipement approprié;
- s'abstenir de nourriture, d'alcool, de tabac et d'activité physique au moins 8 à 12 heures avant l'analyse, sinon les données de la recherche seront faussées;
- 15-20 minutes de relaxation complète avant la collecte de sang;
- arrêt du traitement (si cela n’est pas possible, le laboratoire doit en être averti);
- Les enfants de moins de cinq ans une demi-heure avant l'analyse doivent boire de l'eau bouillie en petites portions.
Comment est l'étude
L'analyse PCR repose sur les principes utilisés en biologie moléculaire. Ils consistent en l'utilisation d'enzymes spéciales qui coupent et répliquent des parties de l'ADN et de l'ARN de l'agent infectieux présent dans le sang. Après cette opération, les échantillons obtenus sont identifiés par la base de données disponible au laboratoire. En même temps, le type d’infection et la concentration dans le sang de l’agent pathogène sont détectés.
Pour l'étude, un amplificateur est utilisé - un thermostat capable de chauffer et de refroidir les tubes avec biomatériau. Cela est nécessaire pour l'activation des processus de réplication. La précision de l'analyse dépend de la précision des paramètres de température.
Résultats de décodage
Un résultat positif pour le patient est la conclusion du laboratoire «non détectée». Cela signifie l'absence d'ADN de l'hépatite B. Dans le sang, cela équivaut à environ 120 UI / ml, soit 200 copies par unité de volume sanguin. Cette valeur est la norme. Pour le matériel biologique, il est essentiel qu'il ne soit pas contaminé.
Le décodage d'autres résultats d'analyse permet d'établir les diagnostics suivants:
- La concentration en ADN de l'hépatite B dans le sang est supérieure à 200 copies, mais inférieure au seuil critique. La pathologie sévère est absente.
- Virémie sous forme légère, jusqu'à 500 copies par ml. Le choix du traitement dépend des indicateurs de la biopsie du foie et du degré de détérioration de ses fonctions.
- Augmentation de la concentration en virus (plus de 500 copies / ml). Le processus inflammatoire dans la phase active et nécessite un traitement antiviral intensif.
- Charge virale maximale (plus de 800 copies par ml). Les mesures thérapeutiques sont développées sur la base de l'état du patient et visent entièrement l'amélioration possible.
Déterminer les indicateurs quantitatifs du contenu en ADN de l'hépatite B au cours de la PCR est la base du choix du traitement. Après trois ou six mois, des tests sont à nouveau effectués pour vérifier l'efficacité du traitement antiviral.
Fonction de réaction en chaîne de la polymérase
Dans la méthode de PCR, on utilise deux approches pour la détermination de l'ADN appartenant au virus: qualitative et quantitative.
Une approche qualitative confirme ou nie la présence de l'hépatite B. La PCR est prescrite à la demande d'un patient soupçonnant d'être infecté par le VHB ou dans le cas où un diagnostic précoce ne donne pas de résultats non ambigus d'une autre manière.
Si le virus de l'hépatite B peut être détecté au plus tard deux semaines après son entrée dans l'organisme, un pronostic positif pour le traitement est très probablement. À l'avenir, la maladie commencera à progresser. Après environ deux mois, elle entrera dans une phase chronique. Une guérison complète dans ce cas deviendra impossible.
Une approche quantitative de la PCR est utilisée uniquement lorsqu'un virus est détecté. Il évalue:
- charge virale spécifique sur le foie;
- l'intensité de la progression de la maladie;
- résistance aux médicaments antiviraux;
- efficacité du traitement.
Ces indicateurs ont une importance pratique directe. Indicateur surtout quantitatif de l'ADN. Le pronostic de la phase aiguë de l’hépatite B dépend de la concentration du virus dans le sang du foie, de sorte que la faible concentration de cellules virales exclut presque totalement le passage de l’hépatite aiguë à l’hépatite chronique. De tels patients ne constituent pas un danger pour les autres. Une charge virale élevée contribue à la chronisation du processus pathologique et au risque d'infection par l'hépatite chez les personnes en contact avec le patient.
Il existe également un lien entre la concentration de gènes viraux dans le sang et la dégénérescence cirrhotique du foie et la survenue d'un cancer du parenchyme.
Les tests PCR aident le médecin à détecter les porteurs de virus.
L'efficacité du traitement antiviral est déterminée par le degré de diminution de la concentration de l'ADN de l'hépatite B dans la circulation hépatique. Un résultat suffisant est la réduction de la charge virale de 1 à 2 fois avec un traitement intensif de 3 mois à 6 mois. Des taux plus bas nécessitent un changement de traitement.
Le pronostic du développement de la pathologie et la désignation d'un traitement approprié proviennent de:
- volume quantitatif de l'ADN du virus hépatique dans le sérum sanguin;
- paramètres biochimiques connexes (par exemple, le taux de leucocytes dans le sang et la teneur en bilirubine dans ce sang);
- marqueurs d'infection virale;
- résultats de biopsie du foie.
PCR à usage général
Les analyses à l'aide de la réaction en chaîne de la polymérase aident le médecin:
- détecter les porteurs du virus;
- prédire le développement de l'hépatite de type B;
- assurez-vous que la maladie devient chronique;
- surveiller l'activité du virus à toutes les phases du développement;
- identifier les souches mutantes et cachées de l'hépatite B;
- évaluer l'efficacité du traitement du virus lors du choix d'une tactique donnée et la modifier en cas de succès insuffisant.
Avantages de la méthode
Contrairement aux autres tests utilisés pour diagnostiquer l'hépatite B, la PCR a:
L'analyse PCR est extrêmement sensible.
- Sensibilité exceptionnelle. La technique permet au chercheur de détecter l'agent causal de la maladie, même si la concentration de ses molécules d'ADN dans le sang est minimale. Cela vous permet de prendre des mesures préventives et curatives à un stade précoce de la maladie, alors qu'apparemment, aucun symptôme ne l'exprime.
- Large couverture d'opportunités. La PCR peut détecter non seulement l'agent causal de l'hépatite virale B, mais également un certain nombre d'autres pathologies.
- Universalité des approches. Le biomatériau utilisé à des fins de recherche peut être le sang, la salive, les cellules muqueuses et la peau.
- L'efficacité La conclusion sera prête exactement un jour après le prélèvement sanguin (le résultat de l'analyse lui-même est obtenu au plus tard 7 heures).
- Crédibilité. Dans toutes les conditions de la méthode PCR, ne montre jamais de fausses données.
- Étude d'accessibilité des prix. Au prix coûtant, la PCR n’est que légèrement supérieure aux tests habituels utilisant du sang comme biomatériau.
Le seul coût de la recherche est sa complexité technologique. Une PCR de haute qualité nécessite un biomatériau extrêmement propre, des équipements modernes et un personnel bien formé. Il est préférable d’appliquer des méthodes de diagnostic utilisant cette méthode à des laboratoires spécialisés.
L'hépatite virale B désigne des maladies pour lesquelles une guérison complète n'est possible que dans les premiers stades de développement. Identifier la maladie au cours de cette phase facilite le diagnostic hypersensible par PCR. Les premiers symptômes qui permettent de suspecter des lésions hépatiques causées par un virus devraient être une raison pour consulter un spécialiste. Si le diagnostic est confirmé, le traitement doit commencer immédiatement. Cela améliorera le pronostic et augmentera les chances de maintenir le foie en bonne santé pendant de nombreuses années.